SEKUENSI UNIVERSAL 100018-USG TELL Seq Library Sequencing

Pandhuan Pangguna Urutan Pustaka TELL-Seq™
Kanggo kabeh sistem urutan Illumina kajaba iSeq 100

Kanggo Riset Gunakake Mung. Ora digunakake ing prosedur diagnostik.
Dokumen # 100018 v8.0
Februari 2025

Dokumen iki duweke Universal Sequencing Technology Corporation lan dimaksudake mung kanggo panggunaan pelanggan sing ana gandhengane karo panggunaan produk sing diterangake ing kene lan ora kanggo tujuan liyane.
Pandhuan ing dokumen iki kudu ditindakake kanthi tepat dening personel sing dilatih kanthi bener kanggo mesthekake panggunaan kit TELL-Seq™ sing bener lan aman.

TEKNOLOGI SEKUENSI UNIVERSAL ORA NANGGUL TANGGUNG JAWAB SAIKI SALAH NGANGGO KIT TELL-SEQ™.
©2022 Universal Sequencing Technology Corporation. Kabeh hak dilindhungi undhang-undhang. TELL-Seq™ minangka merek dagang saka Universal Sequencing Technology Corporation. Kabeh jeneng liyane, logo lan merek dagang liyane sing duwe dhewe.

Pambuka

Protokol iki nerangake carane mbukak pustaka TELL-Seq™ sing dipasangake kanthi indeks ing sistem urutan Illumina®. Pustaka TELL-Seq™† mbutuhake primer urutan khusus kanggo sistem urutan Illumina lan ngemot urutan indeks 18 basis sing digunakake minangka barcode molekuler kanggo maca sing disambung, sing kudu diurutake kanthi lengkap.

 Isi Kit

Kit Primer Urutan TELL-Seq™ Illumina® (PN 100004)

Kit Primer Urutan TELL-Seq™ Illumina®, HT (PN 100013) 

Struktur Pustaka TELL-Seq™ lan Skema Urutan

 

Indeks 1 (yaiku, indeks I7) ngemot urutan Manik TELL basis 18, sing kudu diurutake kanthi lengkap. Indeks 2 (yaiku, indeks I5) ngemot 8-basis (seri-T) utawa 10-basis (seri-C) sample indeks urutan primer digunakake ing perpustakaan amplifikasi. Urutan pungkasan sing dipasangake luwih disenengi. Kebutuhan dawa maca minimal yaiku 2 × 96; Kebutuhan dawa maca maksimal yaiku 2 × 150.

Example saka Illumina® Sequencing% Base dening Cycle Chart

Illumina® Sequencing Guideline

1. Encer perpustakaan TELL-Seq™ miturut konsentrasi lan volume spesifik platform urutan Illumina®.
2. Pustaka bisa dikumpulake bebarengan kanggo urutan nalika macem-macem primer multiplex digunakake ing perpustakaan amplangkah lifikasi.
3. Primer urutan khusus dibutuhake kanggo ngurutake perpustakaan TELL-Seq™ lan kasedhiya ing Kit Primer Urutan Illumina TELL-Seq™.
4. Primer urutan khusus iki bisa dimuat menyang sumur sing ditemtokake kanggo primer khusus. Utawa, uga bisa dimuat menyang sumur primer urutan Illumina® standar sing cocog nalika perpustakaan kontrol Illumina® PhiX dipasang ing urutan urutan.
5. Primer Indeks Custom 2 mung dibutuhake nalika sawetara perpustakaan TELL-Seq™ kanthi primer multipleks beda-beda diklumpukake kanggo urutan lan nalika sequencer mbutuhake primer urutan indeks i5. Saiki mung kanggo MiSeq, Indeks 2 Primer khusus ora dibutuhake. Uga kanggo sistem sing ora didhukung kaya HiSeq 2000/2500 lan reagen NovaSeq v1, indeks khusus 2 primer ora dibutuhake.
6. Jumlah minimal sequencing run bisa dileksanakake nggunakake jumlah sequencing primers kasedhiya mawarni-warni adhedhasar sistem sequencing.

Sistem Sequencing	Apa Indeks 2 Primer khusus dibutuhake?
NovaSeq X/X Plus	ya wis
NovaSeq 6000	ya wis
HiSeq 3000/4000	ya wis
SabanjureSeq	ya wis
MiSeq	Ora
MiniSeq	ya wis

 Examplan Sample Sheet kanggo Sistem MiSeq

Ing ngisor iki ana mantanampsamplembar kanggo 2 × 146 PE roto karo 18-siklus indeks 1 (IE, I7 indeks) lan 8-siklus utawa 10-basis (C-seri) indeks 2 (IE, indeks I5) urutan nggunakake sekuens urutan adat kanggo Read 1 , Indeks 1 lan Waca 2 sing bakal dimuat menyang sumur primer urutan khusus. Amarga MiSeq nggunakake primer P5 ing lumahing sel aliran minangka primer urutan kanggo maca Indeks 2, primer Indeks 2 khusus TELL-Seq ora dibutuhake kanggo sistem MiSeq. Demultiplexing sembarang perpustakaan pooled bakal adhedhasar sampindeks (yaiku, indeks 2). Bakal diproses dening pipa analisis TELL-maca kanthi kapisah sawise urutan urutan rampung.

 

Illumina® Sequencing Rekomendasi Dawa Waca

1. Urutan pungkasan sing dipasangake dianjurake.
2. Pustaka TELL-Seq™ Indeks 1 yaiku 18 basis, Indeks 2 yaiku 8 basis (seri T) utawa 10 basis (seri C). Ana total 26-base (T-seri) utawa 28-base (C-seri) kanggo loro indeks dibandhingake total 16-basa kanggo standar Illumina dual indeks.
3. Siklus 10 ekstra sing dibutuhake kanggo ngurutake indeks perpustakaan TELL-Seq™ kudu dikurangi saka maca 1 lan maca 2 siklus urutan kanthi rata. Wiwit reagen urutan Illumina njamin 2 siklus ekstra, 4-siklus kanggo maca 1 lan 4-siklus kanggo maca 2 kudu dikurangi.
4. Dawane urutan sing disaranake yaiku 2 × 96 PE nganti 2 × 146 PE kanggo roto indeks ganda; 2 × 100 PE kanggo 2 × 150 PE kanggo s singleample mbukak tanpa perlu kanggo Index 2 diwaca.

Pertimbangan Kedalaman Urutan

1. Kedalaman urutan sing nyukupi dibutuhake kanggo entuk jangkoan TELL Bead sing cukup. Sing liyane TELL Beads digunakake ing perpustakaan ampKanggo ngasilake perpustakaan TELL-Seq™, luwih akeh urutan maca sing dibutuhake kanggo entuk kedalaman urutan sing dikarepake. Nanging, luwih sithik TELL Beads digunakake kanggo perpustakaan ampNanging, luwih murah kerumitan perpustakaan, sing bisa nyebabake tingkat duplikasi sing luwih dhuwur saka urutan maca. Imbangan antarane Manik-manik TELL sing digunakake lan kompleksitas perpustakaan TELL-Seq™ sing dibutuhake bisa uga gumantung saka ukuran genom lan aplikasi.
2. Kanggo aplikasi perakitan de novo, paling sethithik 60x jangkoan genom saka sample dianjurake ing umum. Nanging, jangkoan urutan ngisor uga cukup gumantung saka jumlah TELL Beads digunakake kanggo perpustakaan ampkompleksitas perpustakaan lan TELL-Seq™.
3. Kanggo phasing manungsa, paling 500 yuta kluster maca saben sample kang ~ 40x ambane dianjurake.
4. Kanggo urutan sing ditarget, jangkoan minimal 100x dianjurake.

Urutan Indeks Primer Multiplex Pustaka (yaiku, Indeks 2 Waca): T-seri (8-base)

Pustaka Multiplex Primer (T-seri)	Kanggo Sample Lembar MiSeq	Kanggo Sample Sheet NovaSeq, NovaSeq X, NextSeq, MiniSeq
T501	TGAACCTT	AAGGTTCA
T502	TGTAAGT	ACTTAGCA
T503	TGTTCTCT	AGAGAACA
T504	TAAGACAC	GTGTCTTA
T505	CTAATCGA	TCGATTAG
T506	CTAGAACA	TGTTCTAG
T507	TAAGTTCC	GGAACTTA
T508	TAGACCTA	TAGGTCTA
T509	CATCCGAA	TTCGGATG
T510	TTTGAGT	ACTCATAA
T511	AGAGGCGC	GGCCTCT
T512	TAGCCGCG	CCGGCTA
T513	ACGAATAA	TTTTCGT
T514	TTCGTAGG	CCTACGAA
T515	GATCTGCT	AGCAGATC
T516	CGCTCCGC	GGGAGCG
T517	AGGCTATA	TATAGCCT
T518	GCCCTAT	ATAGAGGC
T519	AGGATAGG	CCTATCCT
T520	TCAGAGCC	GGCTCTGA
T521	CTTCGCCT	AGGCGAAG
T522	TAAGATTA	TAATCTTA
T523	AGTAAGTA	TACTTACT
T524	GACTTCCT	AGGAAGTC

 Urutan Indeks Primer Multiplex Pustaka (yaiku Indeks 2 Waca): Seri C,D,E,F (10 basis)

Pustaka Multiplex Primer (seri-C)	Kanggo Sample Lembar MiSeq	Kanggo Sample Sheet NovaSeq, NovaSeq X, NextSeq, MiniSeq
C501	ACGTACGTAC	GTACGTACGT
C502	CATGCATGCA	TGCATGCATG
C503	GTACGTACGT	ACGTACGTAC
C504	TGCATGCATG	CATGCATGCA
C505	ATGTGATCA	TGATCAGCAT
C506	CACAGCTGTG	CACAGCTGTG
C507	GCTGATCAGC	GCTGATCAGC
C508	TGATCAGCAT	ATGTGATCA
C509	ATTCAATACT	AGTATTGAAT
C510	CTAGCGCTAG	CTAGCGCTAG
C511	GCTAGTAGTA	TACTACTAGC
C512	TCAATCAAG	CTTGATTGGA
C513	AATATTGCTG	CAGCAATATT
C514	CGTCGTTACG	CGTAACGACG
C515	GATTGATTCC	GGAATCAATC
C516	TCTAACAATG	CATTGTTAGA
C517	AGAATTGTCA	TGACAATTCT
C518	CTCAGCAATT	AATTGCTGAG
C519	GGTCCTTGTC	GACAAGGACC
C520	AGGCCTGACA	TGTCAGGCCT
C521	CTCCTAGTGG	CCACTAGGAG
C522	GGTTACAGCT	AGCTGTAACC
C523	CTGATTGGCG	CGCCAATCAG

C524	ATTGGTTAGA	TCTAACCAAT
C525	CCATTCAACT	AGTTGAATGG
C526	CAGTATTGAC	GTCAATACTG
C527	GAGTCCTCAA	TTGAGGACTC
C528	AGCTACTACT	AGTAGTAGCT
C529	TAGCTAGCGC	GCGCTAGCTA
C530	GATGCAACAC	GTGTTGCATC
C531	CCTCAGTACA	TGTACTGAGG
C532	CGGTAATTCA	TGAATTACCG
C533	CGCAATGGCT	AGCCATTGCG
C534	GTACGTTGAA	TTCAACGTAC
C535	TTGATCAGTA	TACTGATCAA
C536	GGCCTAACAA	TTGTTAGGCC
C537	GTTGTTGGAA	TTCCAACAAC
C538	TACGTTGGAC	GTCCAACGTA
C539	ACACCATGCA	TGCATGGTGT
C540	GCAATAGTAC	GTACTATTTGC
C541	ACGCAGCCAG	CTGGCTGCGT
C542	CGAGTTGACG	CGTCAACTCG
C543	CGTGGGTGAA	TTCAGCCACG
C544	TTCAAGGAC	GTCTTGAGA
C545	CCTAGGCACT	AGTGCCTAGG
C546	CTGCGGTAAT	ATTACCGCAG
C547	GGCACTACCA	TGGTAGTGCC
C548	GCTCAATCAA	TTGATTGAGC
C549	AGGCACACAC	GTGTGTGCCT
C550	CCTGGCAAGA	TTTGCCAGG

C551	TAATTTGGTAG	CTACCAATTA
C552	GCCAACAAGT	ACTTGTTGGC
C553	ATGGCTATA	TATAAGCCAT
C554	GCATGGCCTT	AAGGCCATGC
C555	ACAATACTGG	CCAGTATTGT
C556	GGATTGGACT	AGTCCAATCC
C557	ACTGTACTAT	ATAGTACAGT
C558	CAGCTGTGAG	CTCACAGCTG
C559	CTTGAGGACC	GGTCCTCAAG
C560	GGTACAATAG	CTATTGTACC
C561	CTGACTACTA	TAGTAGTCAG
C562	TCAACCATGG	CCATGGTTGA
C563	ATTATAACCG	CGGTTATAAT
C564	ACTAGTCCTT	AAGGACTAGT
C565	ACTTGGACGT	ACGTCCAAGT
C566	ATGGTTAGGA	TCCTAACCAT
C567	ATGGTACCAA	TTGGTACCAT
C568	GAATTGACTC	GAGTCAATTC
C569	AGCAACCAGG	CCTGGTTGCT
C570	TACTGTGCTG	CAGCACAGTA
C571	CAACAACGTC	GACGTTGTTG
C572	CAGTAGCGCT	AGCGCTACTG
C573	ATTACCAATC	GATTGGTAAT
C574	TAAGGACCGC	GCGGTCCTTA
C575	ACACGTACCG	CGGTACGTGT
C576	CAACGTTGTT	AACAACGTTG
C577	ATTGTGCTGA	TCAGCACAAT

C578	GTACCAACAG	CTGTTGGTAC
C579	TTGTCAAGGA	TCCTTGACAA
C580	CTTGTACGTA	TACGTACAAG
C581	TGCTTGTAA	TTACAAGGCA
C582	TAGTAGCTTA	TAAGCTACTA
C583	GACCGCAATG	CATTGCGGTC
C584	CTACTAGCTT	AAGCTAGTAG
C585	AGCACACGTT	AACGTGTGCT
C586	TGTTATAAGC	GCTTATAACA
C587	GTTGCCAAGT	ACTTGGCAAC
C588	CTGGCAACCG	CGGTTGCCAG
C589	TTAGGCCTTA	TAAGGCCTAA
C590	CGCAGCACAG	CTGTGCTGCG
C591	CTAGGCACAA	TTGTGCCTAG
C592	TGTTGTACAG	CTGTACAACA
C593	CTAACGTGGC	GCCCGTTAG
C594	GCGTACTGGT	ACCAGTACGC
C595	GGCTGAATT	AATTCAGGCC
C596	CATGCTCGAG	CTCGAGCATG

Pustaka Multiplex Primer (D-seri)	Kanggo Sample Lembar MiSeq	Kanggo Sample Sheet NovaSeq, NovaSeq X, NextSeq, MiniSeq
D501	AGCACTGTAA	TTACAGTGCT
D502	CCGAAGTACT	AGTACTTCGG
D503	GTTACAAGTA	TACTTGTAAC
D504	TGATTGCGTG	CACGCAATCA
D505	ATCTTAGGCA	TGCCTAAGAT

D506	CACGCAAGTT	AACTTGCGTG
D507	GAGCTTAGGA	TCCTAAGCTC
D508	TATTGCTCGA	TCGAGCAATA
D509	AACATCTGAG	CTCAGATGTT
D510	CAACTCAGCA	TGCTAGTTG
D511	GAACTATATG	CATATAGTTC
D512	TAATAGTCTA	TAGACTATTA
D513	AAGATTGACG	CGTCAATCTT
D514	CACGTAGCCG	CGCTACGTG
D515	GACTCGATCA	TGATCGAGTC
D516	TAATCCTCGC	GGGGGATTA
D517	AAGCTTCCTGG	CCAGGAGCTT
D518	CAGATTGTTG	CAACAATCTG
D519	GATGCTATTC	GAATAGCATC
D520	TAATCCTCGC	GGGGGATTA
D521	AAGTATACCT	AGGTATACT
D522	CAGTAGCCAA	TTGGCTACTG
D523	GCAAGGACTC	GAGTCCTTGC
D524	TACTACTGTA	TACAGTAGTA
D525	AATCCTAGCT	AGCTAGGATT
D526	CATTGGCAAG	CTTGCCAATG
D527	GCCTGAGAAT	ATTCTCAGGC
D528	TACTAGCAAG	CTTGCTAGTA
D529	ACAGCTAGTC	GACTAGCTGT
D530	CCAACCAGTA	TACTGGTTGG
D531	GCGCTCAAT	AATGAGCGC
D532	TAGCGCGGAC	GTCCGCGCTA

D533	ACCTATAGTT	AACTATAGGT
D534	CCACGTCAGG	CCTGACGTGG
D535	GCTACGCAAT	ATTGCGTAGC
D536	TAGTTGCTGC	GCAGCAACTA
D537	ACGGTACAAC	GTTGTACCGT
D538	CCGAACTTCG	CGAAGTTCGG
D539	GCTCCTAATT	AATTAGGAGC
D540	TATCCTCGAT	ATCGAGGATA
D541	ACTCGATCT	AGAATCGAGT
D542	CCTGGTAATT	AATTACCAGG
D543	TCGTAGTTGG	CCAACTAAGC
D544	TCAGCAAGGA	TCCTTGCTGA
D545	ACTGGTAGCA	TGCTACCAGT
D546	CGATCACCT	AGGTTGATCG
D547	GGAAGTAGCA	TGCTACTTCC
D548	TCAGCTGCGG	CCGCAGCTGA
D549	ACTGGTAGCA	TGCTACCAGT
D550	CGATCACCT	AGGTTGATCG
D551	GGCAAGATGA	TCATCTTGCC
D552	TCCCCAATG	CATTGGCGGA
D553	AGAATTTAT	ATAAGATTCT
D554	CGCTAGCAAC	GTTGCTAGCG
D555	GCCTTATAT	ATATAAGGCC
D556	TCGAATACTA	TAGTATTCGA
D557	AGCAATGGTA	TACCATTGCT
D558	CGGTCTGATC	GATCAGACCG
D559	GGTCCGCCCAT	ATGGCGGACC

D560	TCGAATACTA	TAGTATTCGA
D561	AGCACTGTAA	TTACAGTGCT
D562	CGTACTACCG	CGGTAGTACG
D563	GGTTCATCGG	CCGATGAACC
D564	TGGAGCTGC	GAGCTCCGA
D565	AGGACGTTAG	CTAACGTCCT
D566	CGTTGACAAT	ATTGTCAACG
D567	GTACTGACAC	GTGTCAGTAC
D568	TCTAAGATAG	CTATCTTAGA
D569	AGTGCTCAAC	GTGAGCACT
D570	CTAAGAACCT	AGGTTCTTAG
D571	GTATAATTAC	GTAATATAC
D572	TGATTGCGTG	CACGCAATCA
D573	ATATTCGACG	CGTCGAATAT
D574	CTATAACGAC	GTCGTTATAG
D575	GTCGTTAGGT	ACCTAACGAC
D576	TGCCACTGAT	ATCAGTGCA
D577	ATCGGCTAAG	CTTAGCCGAT
D578	CTCAAGTTGC	GCAACTTGAG
D579	GTGTGTTCGA	TCGAACACAC
D580	TGCTATAGTC	GACTATAGCA
D581	ATGAGCTATT	AATAGCTCAT
D582	CTCACAACGA	TCGTTGTGAG
D583	TGCTCGATTG	CAATCGAGCA
D584	ATGTTGGACT	AGTCCAACAT
D585	CTGATGTTAG	CTAACATCAG
D586	TGGTAACCAG	CTGGTTACCA

D587	ATTCGAAGTA	TACTTCGAAT
D588	CTTAGCTCCT	AGGAGCTAAG
D589	TGTAATCGAT	ATCGATTACA
D590	CTTGGACTTC	GAAGTCCAAG
D591	TGTACTTGAA	TTCAAGTACA
D592	TTAAGCTAG	CTGAGCTTAA
D593	TTACAACCAG	CTGGTTGTAA
D594	TTCTCAGCCA	TGGCTGAGAA
D595	TTGCATGGCT	AGCCATGCAA
D596	TTGGGGTAC	GTACCGCCAA

Pustaka Multiplex Primer (E-seri)	Kanggo Sample Lembar MiSeq	Kanggo Sample Sheet NovaSeq, NovaSeq X, NextSeq, MiniSeq
E501	AGCCACGGTC	GACCGTGGCT
E502	CCGCCTGAGT	ACTCAGGCGG
E503	GTATATACC	GGTATAAC
E504	CTTCCTGGCA	TGCCAGGAAG
E505	ATCGAATTGC	GCAATTCGAT
E506	CACGTGTTGT	ACAACACGTG
E507	GAGCTGTGTT	AACACAGCTC
E508	TATTACAGAT	ATCGTAATA
E509	AACAATGGCG	CGCCATTGTT
E510	CAACTCGCTA	TAGCAGTTG
E511	GAATTGCTCA	TAGCAATTC
E512	GTGTGTTCGA	TCGAACACAC
E513	CGATTCGAGC	GCTCGAATCG
E514	GTCAACTTA	TAACGTTGAC

E515	GACAATCCTA	TAGGATTGTC
E516	TAATCAGACT	AGTCTGATTA
E517	AAGCTATAT	ATATAAGCTT
E518	CATATTGTAA	TTACAATATG
E519	GATAGGACTT	AAGTCCTATC
E520	ATGCTAGGTT	AACCTAGCAT
E521	GCAAGATTAG	CTAATCTTGC
E522	CAGCTGTATA	TATACAGCTG
E523	GCAAGTCTAA	TTAGACTTGC
E524	TACTAGCAAG	CTTGCTAGTA
E525	AATACTGTTA	TAACAGTATT
E526	CATATCTGAC	GTCAGATATG
E527	GCCACTAAGG	CCTTAGTGGC
E528	CTGGCAATTC	GAATTGCCAG
E529	ACAATAGGCG	CGCCTATTGT
E530	CCATGCTAAG	CTTAGCATGG
E531	GCGAGCGATC	GATCGCTCGC
E532	TAGGTAGTTC	GAACTACCTA
E533	ACCTTGGACC	GGTCCAAGGT
E534	TGACTAATAC	GTATTAGTCA
E535	GCTATATCTG	CAGATATAGC
E536	TCTAGTTCAG	CTGAACTAGA
E537	ACGGTTGAGA	TCTCAACCGT
E538	CTGATTCCGG	CCGGAATCAG
E539	TGGTAACCAG	CTGGTTACCA
E540	GACTCAGACA	TGTCTGAGTC
E541	TTAGCCAATA	TATTGGCTAA

E542	CCTTAAGGCG	CCCTTAAGG
E543	CGTAGCAATC	GATTGCTACG
E544	CATGGTAAT	ATTAGCCATG
E545	ACTCGACAAT	ATTGTCGAGT
E546	CGAGTCTAGG	CCTAGACTCG
E547	GGACTCAGCT	AGCTAGTCC
E548	TCAGCAAGGA	TCCTTGCTGA
E549	CGATTCCTTA	TAAGGAATCG
E550	ATTAGGCAAT	ATTGCCTAAT
E551	TTGTCGAAGG	CCTTCGACAA
E552	TCCAAGTAGC	GCTACTTGGA
E553	AGATAGTCCG	CGGACTATCT
E554	CGCTAACATA	TATGTTAGCG
E555	GGCTAATTGT	ACAATTAGCC
E556	AGGTACGTCA	TGACGTACCT
E557	TTCCAAGTTC	GAACTTGGAA
E558	CGGGCTCCG	CGGGCTCCG
E559	GGTACTAATA	TATTAGTACC
E560	TCGAAGGCAA	TTGCTTCGA
E561	CTCCTTGATG	CATCAAGGAG
E562	GCAATTCGG	CCGGAATTGC
E563	ACTACCGCAGC	GCTGCGTAGT
E564	AGGAATGGCC	GGCCATTCCT
E565	AGGTTAGCAT	ATGCTAACCT
E566	CGTCCTAGAC	GTCTAGGACG
E567	GCGTGGCAAT	ATTGCCACGC
E568	TCTGATCGAC	GTCGATCAGA

E569	AGTTGTCAGG	CCTGACAACT
E570	CTACGCCAAT	ATTGGCGTAG
E571	GTAGTTGCGT	ACGCAACTAC
E572	TAGCGCTAT	ATAGCGCTCA
E573	ATACCTTAGT	ACTAAGGTAT
E574	GACACCATT	AATGGTGTGC
E575	GCTAAGGAG	CTCCTTAGAC
E576	CATTCCGGGG	CCGGGGAATG
E577	GCGTACCTAG	CTAGGTACGC
E578	CTCAATAGCA	TGCTATTGAG
E579	GTGCTAAGCC	GGCTTAGCAC
E580	TGCCACTATC	GATAGTGGCA
E581	GCTGTTGAAT	ATTCAACAGC
E582	CGCTAATCC	GGATTAGCCG
E583	AACTACCGCA	TGCGGTAGTT
E584	ATGCATCAAG	CTTGATGCAT
E585	CTGACTTGCA	TGCAAGTCAG
E586	TGGTACCTAT	ATAGGTACCA
E587	ATTAGCTAAC	GTTAGCTAAT
E588	TGGTACCTAT	ATAGGTACCA
E589	TGTTGCTACC	GGTAGCAACA
E590	CTTATAAG	CTTATAAG
E591	TCAAGTCTGT	ACAGACTGA
E592	TAGCGCTAT	ATAGCGCTCA
E593	TTAGGCGTAC	GTACGCCTAA
E594	TTCTCATCAG	CTGATGAGAA
E595	CTAGGTATTG	CAATACCTAG

E596

TTGTGACTA

TAGTCAGCAA

Pustaka Multiplex Primer (F-seri)	Kanggo Sample Lembar MiSeq	Kanggo Sample Sheet NovaSeq, NovaSeq X, Next Seq, MiniSeq
F501	AGCCAGTAGC	GCTACTGGCT
F502	CCGATGAGTT	AACTCATCGG
F503	GTTCAACTTC	GAAGTTGAAC
F504	TTGAGCATCA	TGATGCTCAA
F505	ATCAACAGTG	CACTGTTGAT
F506	CACACGGTAG	CTACCGTGTG
F507	GAGGATTGCT	AGCAATCCTC
F508	TATCTTGGCC	GGCCAAGATA
F509	AACTAGTGGC	GCCACTAGTT
F510	CAATCCTGGT	ACCAGGATTG
F511	GAAGGTTACG	CGTAACCTTC
F512	CTAAGAACCT	AGGTTCTTAG
F513	CACACGGTAG	CTACCGTGTG
F514	AATTAGTCTG	CAGACTAATT
F515	GACCGTGTTA	TAACACGGTC
F516	TAATTCGAGG	CCTCGAATTA
F517	AAGATTGACG	CGTCAATCTT
F518	CAACTCGCTA	TAGCAGTTG
F519	GATTCGAACT	AGTTCGAATC
F520	GCCTTGAGTT	AACTCAAGGC
F521	CACAGATTAG	CTAATCTGTG
F522	CAGCTAGGCC	GGCCTAGCTG
F523	GCAAGGTATA	TATACCTTGC

F524	TACCTAGGTA	TACCTAGGTA
F525	AATCCTTGAA	TTCAAGGATT
F526	CATCGAACCT	AGGTTCGATG
F527	GCCTGCGTAA	TTACGCAGGC
F528	CATCGAACCT	AGGTTCGATG
F529	ACAGTGCCAT	ATGGCACTGT
F530	CCAACTATTG	CAATAGTTGG
F531	GCGTACCGCA	TGCGGTACGC
F532	TAGGAGCGAT	ATCGCTCCTA
F533	ACCAATGGT	ACCAATGGT
F534	AATACTGTTA	TAACAGTATT
F535	GCTGTTGAAT	ATTCAACAGC
F536	TTACAACCAG	CTGGTTGTAA
F537	ACGTCAAGTC	GACTTGACGT
F538	CAATTCAATG	CATTGAATTG
F539	TGAATTCAGC	GCTGAATTCA
F540	ACGTACAGCT	AGCTGTACGT
F541	TGACTACCAT	ATGGTAGTCA
F542	CCTGGTGTGA	TCACACCAGG
F543	GACTAATCGC	GCGATTAGTC
F544	ACGTTAGTGC	GCACTAACGT
F545	ACTCGATCT	AGAATCGAGT
F546	CGACAAGATT	AATCTTGTCG
F547	GGAATTGGCT	AGCCAATTCC
F548	TCACAGCCGA	TCGGTGTGGA
F549	CTGTACTGTA	TACAGTACAG
F550	TCGCTCGAGG	CCTCGAGCGA

F551	ACCTTAGCAA	TTGCTAAGGT
F552	TCCGGACTAC	GTAGTCCGGA
F553	AGAACTTGCA	TGCAAGTTCT
F554	CGCAGGACTT	AAGTCCTGCG
F555	GGCAAGATGA	TCATCTTGCC
F556	GCCTAGCGCG	CGCGCTAGGC
F557	GACATCGCTA	TAGCGATGTC
F558	CGCTAATCC	GGATTAGCCG
F559	GGTTGAGCTT	AAGCTCAACC
F560	TCGCTCAGGC	GCCTGAGCGA
F561	GCTGATTATA	TATAATCAGC
F562	GCGCTAGTCC	GGACTAGCGC
F563	TATGTCTGAA	TTCAGACATA
F564	AAGCTATAT	ATATAAGCTT
F565	AGGAATGGCC	GGCCATTCCT
F566	CGTAGCGCGC	GCGGCTACG
F567	GCCTGCGTAA	TTACGCAGGC
F568	TCTTAGCGAT	ATCGCTAAGA
F569	AGTTCTAAGA	TCTTAGAACT
F570	CTAGGTATTG	CAATACCTAG
F571	GTAGTACTAC	GTAGTACTAC
F572	TGACAAGTAG	CTACTTGTCA
F573	ATAGTCTGAG	CTCAGACTAT
F574	CTGTGTTACA	TGTAACACAG
F575	GTCTAGCCAC	GTGGCTAGAC
F576	AATCAAGGTT	AACTTGATT
F577	CATAATTATG	CATAATTATG

F578	CTCGAGCTAT	ATAGCTCGAG
F579	GTGCCTGATG	CATCAGGCAC
F580	TGCTCGATTG	CAATCGAGCA
F581	GATTCGAACT	AGTTCGAATC
F582	TCGTTGAGGA	TCCTCAACGA
F583	AGCCAGGCGT	ACGCCTGGCT
F584	ATGTCAGATT	AATCTGACAT
F585	CTGTATATAC	GATATACAG
F586	TGGTGTCAAC	GTTGACACCA
F587	ATTGCATGCT	AGCATGCAAT
F588	AGTATTCATA	TATGAATACT
F589	TGTAATTCCG	CGAATTACA
F590	CTTCCTGGCA	TGCCAGGAAG
F591	TCCGCGCGGA	TCCGCGCGGA
F592	CACTGTTCGG	CCGAACAGTG
F593	TTAGCCAATA	TATTGGCTAA
F594	TTCAGCTGA	TCAGCTCGAA
F595	GTACCGCGCG	CGGCGGTAC
F596	TTGAGCATCA	TGATGCTCAA

Lampiran

Spiking TELL-Seq™ Custom Primer menyang Illumina® Sequencing Primer

Pustaka TELL-Seq™ mbutuhake primer urutan khusus kanggo platform urutan Illumina. Spiking (utawa nggabungake) primisima urutan TELL-Seq™ Illumina khusus menyang primer urutan Illumina standar perlu yen kalebu perpustakaan kontrol PhiX utawa perpustakaan Illumina standar liyane karo perpustakaan TELL-Seq™ ing urutan urutan. Cathetan: TELL-Seq™ Index 1 maca nduweni basis 18 lan mbutuhake urutan 18 siklus; Indeks 2 maca nduweni 8-basa kanggo primer seri T lan 10-basa kanggo primer seri C. Prosedur kanggo spiking primer khusus menyang primer Illumina

• Posisi kartrij, volume total, lan konsentrasi akhir primer khusus kanggo saben platform kasedhiya ing tabel ing ngisor iki.
• Etung volume primer khusus sing bakal ditambahake menyang posisi kartrid primer Illumina adhedhasar konsentrasi pungkasan saka primer khusus ing kartrid.*
• Sawise spiking ing sepisanan khusus, nyetel pipette kanggo setengah saka volume total lan alon-alon pipette munggah lan mudhun kaping lima kanggo nyampur sak tenane.

Kanggo platform MiSeq, MiniSeq, NextSeq lan NovaSeq, aja mriksa posisi kothak "primer khusus" ing s.ample sheet utawa sak persiyapan roto. * Kanggo ngetung pinten primisima khusus kanggo spike menyang sumur, gunakake persamaan (C1)*(V1) = (C2)*(V2) ing ngendi:

• V1 = ngatasi volume primer khusus kanggo spiked
• C2 = konsentrasi final primer khusus sing disaranake saka grafik ing ngisor iki
• V2 = total volume primer Illumina ing grafik ing ngisor iki

Example kanggo platform MiSeq:
100M * V1 = 0.5M * 680L V1 = 3.4 µl

Wigati Penting: Pedoman ing ngisor iki adhedhasar volume primer saiki. Kanggo mesthekake akurasi, ukur volume primer total ing kartrid nganggo pipette sadurunge nerusake persiyapan.

Saben sequencer Illumina® duwe konsentrasi akhir lan volume total sing beda, mula deleng dokumen ing ngisor iki kanggo mesthekake yen jumlah Primer Urutan TELL-Seq™ Illumina® sing cocog ditambahake langsung.

* Cathetan: Indeks 1 lan Indeks 2 bebarengan karo primer Read 1 lan Read 2 asring dikumpulake ing kartrij reagen. Mangga priksa manawa primer khusus konsentrasi akhir kanggo sumur yaiku saben primer (contone. 0.3M saka Indeks 1 lan Indeks 2 kanthi total 0.6Mhttps://knowledge.illumina.com/library-preparation/general/library-preparation-general-reference_material-list/000001542>

Ing ngisor iki

iSeq100
Amarga pambangunan kartrid iSeq100, ora bisa mbukak lan nggunakake primer khusus.

MiniSeq 

SabanjureSeq 

SabanjureSeq 

* Ora ana pilihan kanggo sepisanan Index adat 2 (i5) wiwit cithakan nggunakake sepisanan P5 grafted ing lumahing sel aliran.

HiSeq 1000/2000 – 1500/2300 

* Ora ana pilihan kanggo sepisanan Index adat 2 (i5) wiwit cithakan nggunakake sepisanan P5 grafted ing lumahing sel aliran.

HiSeq 3000/4000 

NovaSeq v1.0 Consumables

Kit versi	Illumina Primer Kab (jeneng)	Kartrid posisi	Total Volume (mL)	adat primer pungkasan konsentrasi (µM)
SP100/200/300/500 siklus	Wacan 1 (BP10)	24	4	0.3
	Indeks 1 (i7) (BP14)*	23	5	0.3
	Wacan 2 (BP11)	13	2	0.3
S1 lan S2 100/200/300 siklus	Wacan 1 (BP10)	24	4	0.3
	Indeks 1 (i7) (BP14)*	23	5	0.3
	Wacan 2 (BP11)	13	2	0.3
S4200/300 siklus	Wacan 1 (BP10)	24	7.3	0.3
	Indeks 1 (i7) (BP14)*	23	5	0.3
	Wacan 2 (BP11)	13	3.5	0.3

* Ora ana pilihan kanggo sepisanan Index adat 2 (i5) wiwit cithakan nggunakake sepisanan P5 grafted ing lumahing sel aliran.

 

NovaSeq v1.5 Consumables

Kit versi	Illumina Primer Kab (jeneng)	Kartrid posisi	Total Volume (mL)	adat primer pungkasan konsentrasi (µM)
SP100/200/300/500 siklus	Waca 1 (VP10)	24	4	0.3
	Indeks 1 (i7) lan Indeks 2 (i5) (VP14)	23	5	0.3
	Waca 2 (VP11)	13	2	0.3
S1 lan S2 100/200/300 siklus	Waca 1 (VP10)	24	4	0.3
	Indeks 1 (i7) lan Indeks 2 (i5) (VP14)	23	5	0.3
	Waca 2 (VP11)	13	2	0.3
S4200/300 siklus	Waca 1 (VP10)	24	7.3	0.3
	Indeks 1 (i7) lan Indeks 2 (i5) (VP14)	23	5	0.3
	Waca 2 (VP11)	13	3.5	0.3

NovaSeq X/X Plus 

Nggawe TELL-Seq™ Run ing Sistem NextSeq™ 1000/2000

Kartrid reagen NextSeq™ 1000/2000 duwe rong sumur khusus (1 lan 2, loro-lorone kosong) kanggo digunakake nalika perpustakaan mbutuhake paling ora siji primer khusus. Ndhukung nganti rong primer khusus (blumbang) kanggo saben sumur khusus. Penting yen primer Read lan Index primer ana ing sumur sing beda. Pustaka TELL-Seq™ mbutuhake primer khusus kanggo kabeh wacan (waca 1, waca 2, indeks 1 lan indeks 2).

Nalika mung perpustakaan TELL-Seq™ sing diurutake sajrone mlaku

• Gabungke TELL-Seq™ read 1 lan maca 2 primer: gunakake HT1 kanggo ngencerake saben campuran primer maca khusus kanggo ngasilake 600 µl ing konsentrasi akhir 0.3 µM, yaiku, 1.8 µl saka 100 µM TELL-Seq™ read 1 primer lan 1.8 µl saka 100 µl µM TELL-Seq™ maca 2 primer menyang 597 µl HT1. Muat menyang sumur khusus 1.
• Gabungan primer indeks TELL-Seq™ 1 lan indeks 2: gunakake HT1 kanggo ngencerake saben campuran primer indeks khusus kanggo ngasilake 600 µl ing konsentrasi akhir 0.6 µM, yaiku, 3.6 µl saka 100 µM indeks TELL-Seq™ 1 primer lan 3.6µl 100µl. Indeks µM TELL-Seq™ 2 primer dadi 593 µl HT1. Muat menyang sumur adat 2.

Pilih sepisanan khusus sing tepat nalika nyetel urutan urutan kaya ing ngisor iki:

• Waca 1: Custom
• 1 Indeks
• 1: Custom
• 2 Indeks 2: Custom
• 2 Waca 2: Kustom 1

Nalika perpustakaan PhiX digunakake karo perpustakaan TELL-Seq™ kanggo ngurutake nalika mlaku

• Entuk Kit Primer NextSeq 1000/2000 (Katalog # 20046117)
• Gabungke TELL-Seq™ read 1 lan maca 2 primer menyang HP21: Tambahake saben campuran primer maca khusus menyang 600 µl HP21 kanggo konsentrasi akhir 0.3 µM, yaiku, 1.8 µl saka 100 µM TELL-Seq™ read 1 primer lan 1.8 µl saka 100 µM TELL-Seq™ maca 2 primer dadi 597 µl HP21. Muat menyang sumur khusus 1.
• Gabungan primer indeks TELL-Seq™ 1 lan indeks 2: gunakake HT1 kanggo ngencerake saben campuran primer indeks khusus kanggo ngasilake 600 µl ing konsentrasi akhir 0.6 µM, yaiku, 3.6 µl saka 100 µM indeks TELL-Seq™ 1 primer lan 3.6µl 100µl. Indeks µM TELL-Seq™ 2 primer dadi 593 µl HT1. Muat menyang sumur adat 2.

Pilih primer khusus sing tepat nalika nyetel urutan urutan kaya ing ngisor iki:

• Waca 1: Custom
• 1 Indeks 1: Custom
• 2 Indeks 2: Custom
• 2 Waca 2: Kustom 1

Nalika perpustakaan Illumina indeks ganda diurutake nganggo perpustakaan TELL-Seq™ bebarengan

• Entuk Kit Primer Read & Index NextSeq 1000/2000 (Katalog # 20046115)
• Gabungke TELL-Seq™ read 1 lan maca 2 primer menyang HP21: Tambahake saben campuran primer maca khusus menyang 600 µl HP21 kanggo konsentrasi akhir 0.3 µM, yaiku, 1.8 µl saka 100 µM TELL-Seq™ read 1 primer lan 1.8 µl saka 100 µM TELL-Seq™ maca 2 primer dadi 597 µl HP21. Muat menyang sumur khusus 1.
• Gabungke primer indeks TELL-Seq™ 1 lan indeks 2 dadi BP14: Tambahake saben campuran primer indeks khusus menyang 600 µl BP14 kanggo konsentrasi akhir 0.6 µM, yaiku, 3.6 µl saka 100 µM indeks TELL-Seq™ 1 primer lan 3.6µl 100µl Indeks µM TELL-Seq™ 2 primer dadi 593 µl BP14. Muat menyang sumur adat 2.
• Pilih primer khusus sing tepat nalika nyetel urutan urutan kaya ing ngisor iki:
• Waca 1: Kustom 1
  Indeks 1: Custom
• 2 Indeks 2: Custom
• 2 Waca 2: Kustom 1

Pitakonan sing Sering Ditakoni

• P: Apa sing kedadeyan yen urutan Indeks 1 ora diurutake kanthi lengkap?
  A: Gagal ngurutake Indeks 1 kanthi lengkap bisa nyebabake kesalahan ing analisis lan interpretasi data hilir. Penting kanggo mesthekake urutan lengkap Indeks 1 kanggo asil sing akurat.
• P: Apa aku butuh primer urutan khusus kanggo kabeh sistem Illumina?
  A: Ya, dhasar urutan khusus dibutuhake kanggo ngurutake perpustakaan TELL-Seq TM ing kabeh sistem Illumina kajaba iSeq 100. Banjur primer diwenehake ing TELL-SeqTM Illumina Sequencing Primer Kit.

Dokumen / Sumber Daya

SEKUENSI UNIVERSAL 100018-USG TELL Seq Library Sequencing [pdf] Pandhuan pangguna 100018-USG TELL Seq Library Sequencing, 100018-USG, TELL Seq Library Sequencing, Seq Library Sequencing, Library Sequencing, Sequencing

Referensi

• Manual pangguna